数据提供 : 大阪大学研究院 药学研究科 分子生物学专业 饭塚 俊辅 

<实验目的>
小鼠肝脏中ROSA26区域扩增的讨论。

<实验方法>
【样品的种类】
从小鼠肝脏中抽提的基因组DNA

【样品的制备方法】
使用DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen公司)提纯小鼠肝脏基因组DNA。

【目的基因名称与长度】
ROSA26  /   300 bp

【引物序列】
Forward Primer  :  GCACTTGCTCTCCCAAAGTC             
Reverse Primer  :  ACACCTGTTCAATTCCCCTG

【反应液组分】                                                           【PCR循环】
  (μl)  
  灭菌蒸馏水                         10.5                                       94℃  1min.  
  KOD OneTM PCR Master Mix 12.5                                       98℃  10sec. 45cycles
  10μM Forward Primer           0.75                                       68℃  30sec.
  10μM Reverse Primer           0.75    
  Template (20ng/μl)              0.5    
  ------------------------
  Total 25  

【仪器类型】
Veriti 96-well Thermal Cycler (Applied Biosystems)

<结果·讨论>
 
使用2%TBE琼脂糖凝胶进行样品电泳。从左边开始第1列是
Invitrogen公司的100 bp ladder，第2~7列是以小鼠肝脏基因组DNA为模板，使用KOD One进行PCR，将得到的扩增片段进行电泳的结果。
全部样品的目的片段为300 bp，都得到了单一的清晰的条带。另外，虽然没有直接进行比较，使用X公司高速PCR酶时，用相同的protocol，同样也可以确认在300 bp附近看到单一的条带。
<感受・建议等>
使用KOD One，使用X公司的高速PCR酶与相同的protocol，都能得到目的片段。
这次实验体验是：按照试剂的protocol，使用方便，PCR的质量与X公司的高速PCR酶相同。