KOD OneTM PCR Master Mix
KOD OneTM PCR Master Mix -Blue-实验例17:植物裂解液的扩增
使用一步法制备的烟叶裂解液,比较用KOD One® PCR Master Mix (无染料,有染料) 及原来的酶对rbcL基因的扩增结果。
【目的片段基因名称与长度】
rbcL / 1.3kb
【引物序列】
Forward Primer: ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC
Reverse Primer: AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA
【反应液的组成】 (μL)
灭菌蒸馏水 Y
KOD One® PCR Master Mix 10
10pmol/μL Primer F 0.6
10pmol/μL Primer R 0.6
裂解液 0.25~1
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Total Volume 20
【循环条件】
98℃, 10sec. 30cycles
60℃, 5sec.
68℃, 7sec.
(5sec. /kb)
原来的PCR酶分别按照推荐的条件进行扩增。
【结果】
KOD One® PCR Master Mix可得到良好的扩增结果。KOD FX Neo也可以有同样的扩增结果,KOD -Plus- Neo,添加1μl裂解液则不能扩增,可见植物组分对PCR有抑制作用。
M : 1kb DNA Ladder
1 :裂解液 0.25μL
2 :裂解液 0.5μL
3 :裂解液 1.0μL