KOD OneTM PCR Master Mix
KOD OneTM PCR Master Mix -Blue-实验例19：通过高速PCR扩增17.5-40kb长片段
[实验目的]：
使用KOD One®以及其他公司扩增长片段的PCR酶一起，以人类基因组DNA为模板扩增较长的片段。
[引物序列]:
| 目标17.5kb Hbg | |||
| 正向引物 | TGCACCTGCTCTGTGATTATGACTATCCCACAGTC | ||
| 反向引物 | ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA | ||
| 目标24kb tPA | |||
| 正向引物 | CCTTCACTGTCTGCCTAACTCCTTCGTGTGTTCC | ||
| 反向引物 | TGTCTCCAGCACACAGCATGTTGTCGGTGAC | ||
| 目标32kb Hbg | |||
| 正向引物 | AGACTTCACATGCTGCTCTGTGCATCCGAGTG | ||
| 反向引物 | ACATGATTAGCAAAAGGGCCTAGCTTGGACTCAGA | ||
| 目标40kb Hbg | |||
| 正向引物 | GTTCTCCTCTGCATATCTCCCCACCGCATCTCTTT | ||
| 反向引物 | CCTTCAGTGCCCATGATGTAGGAAAGTGTGGCATA | ||
[反应条件]
| （1）反应液组成 | （μL） | （μL） | （2）循环条件 | ||||
| 1-3道 | 4-8道 | ||||||
| 无菌蒸馏水 | 7.8 | 3.8 | 98℃，10秒。 |
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30cycles | ||
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KOD One® PCR Mix |
10 | 10 | 60℃，5秒。 | ||||
| 10 pmol /μL引物F. | 0.6 | 0.6 | 68℃，10秒/ kb | ||||
| 10 pmol /μL引物R. | 0.6 | 0.6 | |||||
| 10ng /μL人类基因组DNA | 1 | 5 | 其他公司的PCR酶在制造商推荐的条件下进行。 | ||||
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| 总量 | 20 | 20 | |||||
结果：
使用 KOD One®PCR Mix时，确认能够扩增17.5〜40KB的片段。
