最适于DNA/RNA片段的脱磷酸化。容易热失活，使用方便。
牛来源的脱磷酸化酶 Calf Intestine Alkaline Phosphatase
用途
●防止克隆载体的自身连接反应
●由Kinase利用[γ-32P]ATP对DNA/RNA进行5'末端标记的前处理
说明
本酶分子量为100,000，等电点(PI)=5.7，最适pH值为10.0～10.5，具有分解DNA及RNA的单磷酸酯键的活性。
不对双磷酸酯键或三磷酸酯键起作用，但对ATP等的焦磷酸结合显示出弱水解活性。抑制剂有Cu2+、Ag+、Hg2+及EDTA等。
连接反应中DNA片段的5’末端必须有磷酸根，利用这一点，使用本酶对内切酶处理后的载体进行脱磷酸化处理，可防止自连反应。
另外，制作5’末端标记探针时，预先除去探针的5’端磷酸根，可提高由Kinase利用[γ-32P]ATP添加标记磷酸根的效率。
特征
●高耐热性
本酶显示出较高的耐热性，适用于平滑末端DNA片段等的高温长时间处理。
原理
实验例
实验例：BAP与CIAP热稳定性的不同
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将BAP与CIAP的热稳定性进行了比较。 |
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参考文献
1)H. N. Ferunley, The Enzymes (3rd Ed.), 4: 417-447(1971)
2)R. K. Morton, Biochem. J., 61: 232-240(1955)
3)F. Dray et al., Methods of Enzymatic Analysis, 9: 348-362(1986)
4)P. Rathman and B. B. Saxtena, Methods of Enzymatic Analysis,9: 396-404(1986)
- 产品内容
Calf Intestine Alkaline Phosphatase(1-3U/μl)
10×Buffer〔CAP-1B〕组分:
30mM Triethanolamin(pH7.6)
1mM MgCl2
50% Glycerol10×Buffer组成:
500mM Tris-HCl (pH8.0)
活性的定义:
在37℃、pH10.2下，1分钟内加水分解1μmole对硝基苯磷酸盐（p-Nitorophenyl phosphate）时所需的酶量为1U。
来源:
Calf intestine
纯度:
5U的本酶和1μg的λDNA/HindⅢ分解物在37℃下反应16小时，DNA电泳模式未见变化。
2U的本酶和2μg的tRNA在37℃下反应16小时，tRNA电泳模式未见变化。
- 基本反应条件
<5'突出末端>
灭菌蒸馏水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 10U
Total Volume 200μl
↓
37℃, 30min.
< 平滑末端、3'突出末端>
灭菌蒸馏水Xμl
DNA 5-20pmoles 5'端
10×Buffer 20μl
Alkaline Phosphatase 30U
Total Volume 200μl
↓
37℃, 15min.
50℃, 15min.
- 几点建议
●反应后样品的纯化
本酶在65℃、30min.加热处理，几乎完全失活，为了接下去能进行成功的连接反应，建议进行苯酚处理或用试剂盒进行纯化。
可推荐本公司纯化试剂盒MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- 。本酶耐热性高，加热处理不会失活。本酶带入连接反应中后，效率会大幅度降低，所以反应后的样品必需用苯酚处理，或用试剂盒进行纯化。纯化试剂盒推荐用MagExtractorTM -PCR & Gel Clean up- 等。
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| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| MagExtractorTM –PCR & Gel Clean up- | NPK-601 | 200次份 | RMB 1,200 | 室温 |
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