具有连接DNA片段及Nick部位活性的酶。
T7 Phage来源的耐热性RNA合成酶 Thermo T7 RNA Polymerase (TT7)
用途
●高标记RNA探针的制备
●RNA splicing反应前体的制备
●以Cap类似物为引物，制备具有Cap构造的mRNA
●in vitro 翻译用mRNA的制备
说明
Thermo T7 RNA Polymerase是用基因工程学方法对T7 phage来源的RNA Polymerase导入了点突变，提高了耐热性。
相对于野生型T7 RNA Polymerase，提高了耐热性，在高达50℃下仍可进行反应、且在37℃下的比活性也有了提高。
实验例
1.热稳定性的比较
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将野生型T7 RNA Polymerase在48℃，Thermo T7 RNA Polymerase在50℃条件下进行温育，比较其残余活性。
50℃时的半衰期
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2.高温下in vitro 转录反应
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使用野生型 T7 RNA Polymerase与Thermo T7 RNA Polymerase ，比较了各温度下in vitro 转录的活性。
结果显示，Thermo T7 RNA Polymerase 在51℃条件下，仍可进行转录反应。
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参考文献
1)K. Ishikawa et al., Nucl. Acids Res., 33: e112(2005)
2)M. Itoh et al., Nucl. Acids Res.,30: 5452-5464(2002)
3)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2235(1973)
4)M. Chamberlin and J. Ring, J.Biol. Chem., 248: 2245(1973)
- 产品内容
Thermo T7 RNA Polymerase (50U/μl) 150μl
10×Buffer 1ml×2支
组成:
20mM KPO4 (pH7.5)
100mM NaCl
0.1mM EDTA
5mM DTT
0.01% Triton X-100
50% Glycerol
10×Buffer组成:
400mM Tris-HCl (pH8.0)
500mM NaCl
80mM MgCl2
50mM DTT
活性的定义:
以T7 DNA为模板，在37℃下，在1小时内将1nmole的[3H]-rNTP摄入为酸不溶性沉淀物所需的酶量为1U。
来源:
E.coli 重组体
纯度:
25U的本酶和1.5μg的pT7-2 DNA在37℃下反应2小时，DNA电泳模式未见变化。
100U的本酶和2.4μg的[3H]-RNA在37℃下反应2小时，生成的酸可溶性分解物在0.02μg以下。
100U的本酶和1.7μg的[3H]-RNA在37℃下反应4小时，生成的酸可溶性分解物在0.02μg以下。
- 基本反应条件
灭菌蒸馏水Xμl
10×Buffer 5μl
10mM rNTPs 2μl
RNase inhibitor 20U
模板DNA 100～1000ng
Thermo T7 RNA Polymerase 25～100U
Total Volume 50μl
↓
37～50℃、30～60min
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