KOD SYBR® qPCR Mix实验例2:基因组DNA的相对定量
【数据提供】
日本大学 药学部 基因组制药学研究室 小林 秀昭 老师
【结果】
1. 融解曲线 (模板DNA 5ng)
用KOD SYBR® qPCR Mix的融解曲线只有一个峰,用A公司荧光定量PCR试剂得到了多个峰。
2. 扩增曲线
KOD SYBR® qPCR Mix与A公司的荧光定量PCR试剂都可以确认对样品进行了定量扩增。KOD SYBR® qPCR Mix的扩增起峰更早一些,另外,可以确认在达到平台期之前都是直线扩增的。与之相对,A公司的荧光定量PCR试剂,从中间开始斜率就变得比较缓和了。
【样品】基因组DNA
【基因名】A
【引物】 Primer1: 24mer, Tm 60℃、Primer2: 24mer, Tm 58℃
【目的片段长度】 533bp
【反应条件】
KOD SYBR® qPCR Master Mix 5μL
50×ROX reference dye 0.2μL
Primer1 (10μM) 0.2μL
Primer2 (10μM) 0.2μL
模板DNA 1μL
DDW 3.4μL
Total 10μL
【PCR循环】
98℃, 2 min.
↓
(98℃, 10 sec. - 60℃, 10 sec. - 68℃, 30 sec) × 40 cycles
↓
melt curve
荧光定量PCR试剂>
95℃, 20 sec.
↓
(95℃, 3 sec. - 60℃, 30 sec.) × 40 cycles
↓
melt curve
【检测仪器】 StepOnePlus (life technologies)
【评价】
KOD SYBR® qPCR Mix可以直接用PCR时使用的引物。因此感觉非常方便,用途也非常广泛。