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改良型荧光定量PCR用细胞裂解&Cdna合成试剂盒（使用培养的细胞） SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR

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TOYOBO

价格表

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
SCQ-401 100次份 RMB 4,800 -20℃ 产品说明书
SCQ-401S 20次份 RMB 1,000 -20℃ 产品说明书

SuperPrep® II Cell Lysis for qPCR

Code No. 包装 价格 保存温度 说明书
SCQ-501 100次份 RMB 2,400 -20℃ 产品说明书
SCQ-501S 20次份 RMB 500 -20℃ 产品说明书

用途

Realtime PCR 用cDNA的合成


说明

SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR[Code No. SCQ-401]是通过荧光定量PCR进行基因表达分析用的、由细胞裂解试剂(Lysis Reagents)和逆转录反应试剂(RT Reagents)组成的试剂盒。使用本产品，可以从用96孔板等培养的细胞开始，简便地制备含有能用作逆转录模板的RNA的细胞裂解物。而且，本试剂盒中含有的逆转录反应试剂，针对于从该细胞裂解物开始的逆转录反应进行了优化。

以前的SCQ-101， 在Lysis Solution处理后，必需要添加Stop Solution。SuperPrep® II 中，Lysis Solution处理后，可直接进行cDNA合成步骤。另外，可以使用更多种哺乳类细胞进行高灵敏度地检测。使用本试剂盒，可以简便、迅速地从培养细胞开始合成荧光定量PCR用的模板cDNA。

SuperPrep®ⅡCell Lysis Kit for qPCR [Code No. SCQ-501]是单独销售的细胞裂解试剂（Lysis Reagents）。可以使用本公司的RNA-direct™ Realtime PCR Master Mix (Code No. QRT-101, QRT-201) ,THUNDERBIRD® Probe One-step qRT-PCR Kit (Code No. QRZ-101) 等1-step法Realtime PCR试剂进行分析（简易测定）。




 

特征

●无需纯化RNA
可简便地从培养细胞开始制备能用作逆转录反应模板的含有RNA的细胞裂解液。以Lysis Solution 处理的裂解液为模板，可直接进行逆转录反应，所以可大幅度缩短分析时间。


●从裂解液合成高品质的cDNA

通过优化的buffer组成，有效地抑制了因RNase等的细胞成分引起的RNA的降解（制备的裂解物中的RNA可在冰上稳定保持6小时）。另外，因为用gDNA Remover (DNase I)处理后再进行cDNA的合成，所以可以合成基因组DNA污染少的高质量的cDNA。逆转录试剂是用本公司的高效率逆转录酶「ReverTra Ace®」进一步优化后的Master Mix，可简便、高效率地合成cDNA。合成的cDNA可长期保存。

※Master Mix中Random 引物和Oligo dT引物按最适比例进行了混合。


●可用于多种类型的哺乳类细胞
SuperPrep® II 在提高了细胞裂解性能的同时，也降低了RNase 的影响。与以前的SCQ-101相比，可使用更多种类的细胞进行分析。已确认下表中的代表性细胞可适用于本品。



          细胞名称     贴壁／悬浮           种类                       细胞                                                       来源 

1

HPA

贴壁

H.sapiens

preadipocytes (primary cell)

前体脂肪细胞

2

HEK

贴壁

H.sapiens

epidermal keratinocytes (primary cell)

表皮角质细胞

3

HA

贴壁

H.sapiens

astrocytes (primary cell)

星形胶质细胞

4

HDF

贴壁

H.sapiens

dermal fibroblasts (primary cell)

皮肤纤维芽细胞

5

HFLS

贴壁

H.sapiens

fibroblast-like synoviocytes (primary cell)

成纤维样滑膜细胞

6

HBEpC

贴壁

H.sapiens

bronchial epithelial cells (primary cell)

支气管上皮细胞

7

HUVEC

贴壁

H.sapiens

umbilical vein endothelial cells (primary cell)

脐静脉内皮细胞

8

HPAEC

贴壁

H.sapiens

pulmonary artery endothelial cells (primary cell)

脐动脉内皮细胞

9

HC

贴壁

H.sapiens

chondrocytes (primary cell)

软骨细胞

10

HOb

贴壁

H.sapiens

osteoblasts (primary cell)

成骨细胞

11

HSkMC

贴壁

H.sapiens

skeletal muscle cells (primary cell)

骨骼肌细胞

12

HAOSMC

贴壁

H.sapiens

aortic smooth muscle cells (primary cell)

主动脉平滑肌细胞

13

HFDPC

贴壁

H.sapiens

hair follicle dermal papilla Cells (primary cell)

人毛乳头细胞

14

HMSC

贴壁

H.sapiens

marrow stromal cell (primary cell)

骨髓间质细胞

15

A431

贴壁

H.sapiens

epidermoid carcinoma cell line

表皮癌细胞系

16

HeLa S3

贴壁

H.sapiens

cervix carcinoma cell line

宫颈癌细胞系

17

HepG2

贴壁

H.sapiens

hepatocellular carcinoma cell line

肝癌细胞系

18

C2C12

贴壁

M. musculus

myoblast cell line

成肌细胞

19

NIH-3T3

贴壁

M. musculus

embryo fibroblast cell line

胚胎纤维母细胞

20

MDCK

贴壁

C. familiaris

kidney cell line

肾脏细胞

21

CHO-K1

贴壁

C. griseus

ovary cell line

卵巢细胞系

22

Jurkat

悬浮

H.sapiens

T lymphocyte cell line

T淋巴细胞系

23

K562

悬浮

H.sapiens

myelogenous leukemia cell line

粒细胞白血病细胞系

24

THP-1

悬浮

H.sapiens

acute monocytic leukemia cell line

急性单核细胞白血病细胞系

25

U937

悬浮

H.sapiens

leukemic monocyte lymphoma cell line

单核细胞白血病淋巴瘤细胞系

26　　

HMNC

悬浮

H.sapiens

mononuclar cells (primary cell)

单核细胞



●降低了高通量分析时的误差

按照本操作步骤，移液分管及稀释操作步骤减少，降低了高通量分析时的误差。另外，细胞裂解时无需用移液枪头上下吹打混匀，而且同时可进行gDNA Remover处理，提高了操作性。无需添加反应终止液及引起RNA不稳定的加热操作。

●可以与各种荧光定量PCR试剂组合使用

可以与各种各样的荧光定量PCR试剂（SYBR® Green I, TaqMan® assay两种都可以）组合使用。

另外，与本公司的THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix(Code No. QPS-101 、KOD SYBR® qPCR Mix (Code No. QKD-201)等组合使用，已确认可以从培养细胞开始简便且高度准确的进行基因表达分析。而且，与本公司的RNA-direct™ Realtime PCR Master Mix (Code: QRT-101, QRT-201)等的1-step荧光定量PCR试剂组合使用， 可进行简易的分析。



 

实验例

1. 纯化RNA与细胞裂解液的Ct值相关性的检验


使用SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401)，从 2.5x104 个H UVEC (人脐带静脉内皮细胞)细胞开始合成cDNA(40μl 反应体系)。另外，从HUVEC 细胞抽提的Total RNA66.6ng 开始，使用ReverTra Ace® qPCR RT Master Mix (Code No. FSQ-201) 进行cDNA的合成(40μl 反应体系)。分别以各自的cDNA 为模板，使用THUNDERBIRD® SYBR® qPCR Mix (Code No. QPS-201)对15种House Keeping Gene 进行荧光定量PCR。
结果显示，这次分析的15种基因， 纯化RNA与使用细胞裂解物分析得到的结果具有良好的相关性。


2. 细胞裂解液在冰上稳定性的确认


使用SuperPrep® II Cell Lysis & RT Kit for qPCR (Code No. SCQ-401)，将4x104 个HeLa S3 细胞制备成细胞裂解液，转移到冰上，0 ～ 6小时后，取样细胞裂解液，立即进行cDNA 的合成。同样方法，本公司原来的产品(SuperPrep®) 及A公司的试剂制备细胞裂解液，同样时间点取样，进行cDNA合成。以该cDNA为模板，使用THUNDERBIRD® Probe qPCR Mix (Code No. QPS-101) 进行荧光定量PCR对GAPDH基因的表达进行分析。
结果显示，可以确认HeLa S3 细胞在冰上放置6 小时，Ct值也不会有显著延迟。


3.悬浮细胞的96孔板分析及基因表达分析的实验例




 
产品内容

【SCQ-401】
(Lysis Reagents)
Lysis Solution                 6.5ml×1支
gDNA Remover                 33μl×1支 
RNase Inhibitor               110μl×1支

(RT Reagents)
5×RT Master Mix             860μl×1支
5×RT Mastre Mix no-RT control 
                                       86μl×1支 
Nuclease free Water      1,700μl×2支

【SCQ-501】
Lysis Solution                  6.5ml×1支
gDNA Remover 　　　　  　33μl×1支 
RNase Inhibitor 　　　　   110μl×1支

基本反应条件


按以下比例(1个反应)向Lysis Solution中添加
RNase Inhibitor 和 gDNA Remover
  Lysis Solution     58.7μl
  RNase Inhibotor       1μl
  gDNA Remover       0.3μl
               ↓
向含有细胞的各孔中添加Lysis Solution 
(含有RNase Inhibitor 及 gDNA Remover)
 60μl
               ↓
振荡30sec.后，室温温育4min.30sec.
               ↓
冰上

<逆转录(RT)反应>
按以以比例(1个反应)在冰上制备RT Master Mix
  5x RT Master Mix     8μl
  Nuclease-free Water 24μl
               ↓
每孔32μl分装
               ↓
添加裂解液8μl
               ↓
37℃,15min.
50℃, 5min.
98℃, 5min.

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