用途
●对唾液、咽部/鼻咽拭子采样液等样品进行新型冠状病毒（SARS-CoV-2）基因的检测
※本试剂盒为科研试剂。未通过基于医药品、医疗器械等法规的体外诊断用医药品的认可认证等。
但是，「使用临床检测样本取得测评结果的2019-nCoV基因检测方法」(厚生劳动省健康局结核感染症科 国立传染病研究所 2020年8月18日版)中记载、公开的公共医疗保险的适用对象。
出处:「关于疑义解释资料的发送(其中的28)」(厚生劳动省)(https://www.mhlw.go.jp/content/12400000/000660370.pdf)(令和2年8月18日)
说明
本产品是可通过Multiplex PCR同时检测SARS-CoV-2 RNA的N基因来源的2个区域及内部标准(内参)的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)检测目的的Realtime 1-step RT-PCR试剂盒。
无需进行RNA抽提纯化操作，将唾液、鼻咽拭子采样液等样品与预处理液混合并进行热处理、通过Realtime 1-step RT-PCR反应，即可检测病毒RNA。
通过改良预处理液及PCR反应组分，既提高了对抗样品抑制的能力，又提高了样品的添加量。
特征
●多重PCR扩增
通过多重PCR扩增SARS-CoV-2 RNA的N基因的2个区域(N1,N2)，N1区域用Cy5、N2区域用ROX、内参用FAM通道检测。1支管中能同时检测2个区域，试剂制备比较方便。
●降低了假阴性风险
含有内参，降低了假阴性风险。
●提高了样品的添加量
本公司原来的产品[Code No. NCV301/NCV302]中，能添加的样品量为6μL，本产品能添加到8μL。
●迅速
从样本开始大约60分钟即可检测出新型冠状病毒(SARS-CoV-2)。
●简便
无需提纯核酸。将样品(咽部/鼻咽拭子采样液、唾液、病毒培养液等)与预处理液混合，只要通过热处理，就可进行PCR。
●可降低因Carryover污染导致的假阳性风险
酶液中含有Uracil-DNA Glycosylase(UNG)，可分解错误混入的扩增产物，所以可防止因Carryover污染导致的假阳性。
实验例
- 产品内容
预处理液 660μL×1支
反应液 1,100μL×3支
酶液 550μL×1支
引物・探针溶液 550μL×1支
- 注意事项
实验样品的组分及Realtime PCR仪器的不同可能会影响检测的灵敏度。对于添加了实验样品的反应液，请进行阳性对照RNA的Spike试验，事先确认检测灵敏度。
「病原体检测手册 2019-nCoV 4. 使用TaqMan 探针通过Realtime one-step RT-PCR法进行2019-nCoV的检测」中刊登的N set用、N2 set用的阳性对照(国立感染症研究所发放的及同等市售产品)不适用于本试剂盒。
另外，只匹配美国CDC的引物・探针序列的相应阳性对照产品也不适用于本试剂盒。
- 基本反应条件
①预处理
预处理液 3μL
实验样品 8μL
Total 11μL
室温放置5min.左右、95℃、5min. 热处理
②RT-PCR反应液
反应液 30μL
酶液 5μL
引物・探针溶液 5μL
预处理过的样品或对照 11或10μL
Total 51或50μL
循环条件
LightCycler®96,
LightCycler®480 Instrument II
7500Fast*, QuantStudio 5*
CFX96 Touch,
CFX96 Touch Deep Well
Thermal Cycler Dice III
逆转录反应 42℃ 5min.
预变性 95℃ 10sec.
变性
延伸 95℃
60℃ 5sec.
30sec. 45 cycles
(检测)
*请不要用ROX校正，以Standard Mode 进行实验。
※可使用除了上述以外的可测定3个波长的Realtime PCR的仪器。
仪器不同，最适反应条件也不同，使用没有标明反应条件的仪器时，请咨询东洋纺技术热线。
- 几点建议
RT-PCR反应结束后，反应液出现白色浑浊，但不影响检测结果。
