可对KOD酶系列扩增的平滑末端PCR产物直接进行克隆。
高效率TA克隆试剂盒 TArget Clone™/TArget Clone™-Plus-
价格表
TArget Clone™
| Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书 |
|---|---|---|---|---|
| TAK-101 | 10次份 | RMB 300 | -20℃ |
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TArget Clone™-Plus-
| Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书 |
|---|---|---|---|---|
| TAK-201 | 10次份 | RMB 380 | -20℃ |
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用途
●普通的TA克隆 「TArget CloneTM」
●KOD系列扩增得到的平滑末端产物的TA克隆 「TArget CloneTM -Plus-」
●对KOD系列扩增得到的平滑末端产物进行加dA反应 「10×A-attachment Mix 」
说明
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本品是高效率TA克隆试剂盒。Taq系列酶扩增的PCR产物及KOD系列酶扩增的平滑末端PCR产物均可直接进行TA克隆。Taq、Tth DNA polymerase、Blend Taq®、KOD Dash等酶的扩增产物的3'末端通常带有dA,可直接与T载体连接(→使用TArget CloneTM)。 |
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特征
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●快速・高效率
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实验例
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使用各类PCR产物比较TA克隆的效率用高保真性酶KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2及Blend Taq，对来自human genome的β-globin基因0.5kb进行PCR扩增。分别用TArget Clone以及TArget CloneTM -Plus-对未经纯化的PCR产物进行TA克隆，连接到pTA2 载体。结果可见，对KOD -Plus-、KOD -Plus- ver.2的扩增产物进行克隆时，使用TArget CloneTM -Plus-，克隆效率可得到大幅度提高。 另一方面对Blend Taq的扩增产物进行克隆时，用TArget CloneTM -Plus-相比，虽然效率有很大下降，但是使用TArget Clone也可以高效率地进行TA克隆。
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参考文献
1) H. Mizuguchi et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768 (1999)
产品使用的文献
1) F. Ge et al., Journal of Biochemistry, 143(5): 603-609. (2008)
- 产品内容
【TAK-101】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
【TAK-201】
pTA2 Vector(50ng/μl) 10μl
2×Ligation Buffer 50μl
T4 DNA Ligase 10μl
10×A-attachment Mix 10μl
- 基本反应条件
「TArget Clone」TM
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.
「TArget CloneTM -Plus-」
KOD酶扩增的PCR产物 9μl
10×A-attachment Mix 1μl
Total Volume 10μl
60℃、10min.
↓
灭菌蒸馏水(3-X)μl
2×Ligation Buffer 5μl
pTA2 Vector (50ng/μl) 1μl
上述处理后的PCR产物Xμl
T4 DNA Ligase 1μl
Total Volume 10μl
室温(15～25℃)、30min.
- 几点建议
●使用纯化后PCR产物时A-attachment Mix的使用方法
如PCR反应后产生杂带，则需对PCR产物纯化后再使用。纯化后，再添加A-attachment Mix、dNTP、Mg、PCR Buffer和1×浓度的PCR Buffer后再进行反应。
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| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
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●TArget Clone™ -Plus-对应的PCR酶
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| KOD FX Neo | KFX-201 | 200U×1支 | RMB 2,400 | -20℃ |
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