KOD FX 实验例13: 植物样品(叶・米粒)的PCR扩增例
对于难以直接扩增的植物叶子、精米等,可用简便的一步法配制Lysate,以此为样品,用KOD FX进行扩增。
「前处理方法」
【基因名】 rbcL
【样品】 番茄叶、烟草叶、稻叶、精米
【目的片段长】 约 1.3 kb
【引物】
【样品】
【结果】
Primer F1:5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer R1:5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’ (番茄叶&烟草叶用)
Primer F2:5’-ATGTCACCACAAACAGAAACTAAAGC-3’ (稻叶用)
Primer R2:5’-AAGCTGCGGCTAGTTCAGGACTCCA-3’ (稻叶用)
94°C 2 min.
(98°C 10 sec. 68°C 1.5 min.)×30cycles
※引物的Tm值未满72℃的情况下,请用三步法。
【PCR组成】
灭菌蒸馏水 10<μl>
2x PCR Buffer for KOD FX 25
2mM dNTPs 10 (0.4 mM)
10 pmol/μl F 1.5
10 pmol/μl R 1.5
KOD FX (1U/μl) 1(1U)
Lysate(一步法) 1
---------------------------------------------------------------
Total 50 μl
【评语】
用本方法,以番茄叶、烟草叶、稻叶及精米的Lysate为样品,均可确认到明亮的扩增条带。(该扩增只有在用KOD FX的情况下才能确认到)。用一步法结合KOD FX,即可大大简化植物基因分析的步骤。