KOD FX实验例14: 直接使用鼠尾裂解液：转基因鼠的基因分型
【目的】
直接使用Mouse tail溶解液，进行转基因小鼠的基因分型，并进行同源性/异源性判定。被插入基因周围的序列如下。
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※本实验所用的转基因小鼠尾巴及引物相关信息由国立循环器官病中心的荒井勇二老师提供。 |
【方法】
1. 配制Mouse tail Lysate(碱裂解法)
Mouse tail用如下的方法(碱裂解法)进行简单地处理，取上清1 μl进行PCR反应。
【碱裂解法】
2. PCR
● KOD FX (TOYOBO)
＜反应条件＞
2x PCR buffer for KOD FX 25 μl
2mM dNTPs 10 μl
10pmol /μl Primer #1 1.5 μl
10pmol /μl Primer #2 1.5 μl
Mouse tailLysate 1 μl
PCR grade water 10 μl
KOD FX (1.0U/μl) 1 μl
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Total reaction volume 50 μl
＜PCR循环条件＞
94℃ 1min.
(98℃ 10sec.,68℃ 3min.)×30cycles
● A公司高效率PCR酶
＜反应条件＞
使用推荐条件
＜PCR循环条件＞
(98℃ 10sec.,68℃ 3min.)×30cycles
● B公司高效率PCR酶
＜反应条件＞
使用推荐条件
＜PCR循环条件＞
94℃ 1min.
(98℃ 10sec.,68℃ 3min.)×30cycles
72℃ 10min.
【结果】
取PCR扩增产物5μl用1％琼脂糖凝胶电泳进行分析。
结果可见，只有用KOD FX的情况下，各片段均可得到均一的扩增。
KOD FX还可直接对全血、植物样品(叶、米粒)、酵母进行扩增，无需任何前处理！
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