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KOD FX
实验例15: 使用转基因鼠鼠尾扩增进行基因分型例

【样品】
转基因小鼠尾巴Lysate



Mouse tail前处理方法」





【反应条件与循环】



PCR条件】



 模板: 50μl反应体系中使用按上述方法配制的Mouse tail Lysate 2μl



<反应条件>
                                               终浓度
   PCR grade water                              9 μl
  2x PCR buffer                                   25 μl                 1×
   2mM dNTPs                                    10 μl            0.4mM each
  10pmol /μl Primer #1                     1.5 μl            0.3μM
  10pmol /μl Primer #2                     1.5 μl            0.3μM
  Mouse Tail Lysate                             2 μl  
  KOD FX (1.0U/μl)                               1 μl            1.0 U / 50μl
----------------------------------------------------------------------------------------
Total reaction volume                       50 μl 



<循环>
95℃ 2min

(95℃ 30sec, 60℃ 30sec, 72℃ 1min)×40cycles

72℃ 3min

4℃ ∞



【結果】






 【评语】
适合于粗样品的KOD FX与碱裂解法组合使用,可简便地对转基因小鼠进行基因分型







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 <注意>
1. 接触热碱性溶液时,请务必十分小心。
2. 不推荐将用Proteinase K配制的Lysate直接用于PCRProteinase KSDSPCR反应可能会有不良影响。
请注意,使用时需纯化。
想对Lysate直接进行PCR时,推荐使用上述的『碱裂解法』。






 

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