KOD FX实验例17~20
实验例1: 使用小鼠基因组DNA的PGK neo基因的检测
【基因名】PGK neo
【样品】Mouse genomic DNA 5~10ng
【目的片段长】1.5kb
【引物】30mer, 0.4μM (final)
【循环】
KOD FX:
94℃ 2min , (98℃ 10sec, 68℃ 90sec)x30
A公司Long PCR酶:
94℃ 2min, (94℃ 30sec, 60℃ 2min)x30, 72℃ 2min
【数据提供】
东京大学研究生院 医学系研究科 细胞分子药理学教室 (饭野研究室)
金丸 和典 老师
【来自老师的评语】
用原有的产品比较难扩增的目的片段,用KOD FX可得到明亮的检测结果,非常吃惊。而且用KOD FX非特异性扩增也消失了。
实验例2: Chick GAD67启动子区域的克隆化
【基因名】Chick GAD67 的Promoter区域
【样品】Chick kidney genomic DNA 0.1μg
【目的片段长】6273bp
【引物】
F primer:TCAGGTTGGTGTTCTCTCACTG 22mer
R primer:TCAGCGCGGGTTGAAAGGAAGC 22mer
【循环】
KOD FX: (98,10sec- 68,7min) x35 cycles
KOD FX以外:推荐条件
【数据提供】
京都大学医学部神经生物学教研室(第一生理学教室)
石井 孝广 老师
【来自老师的评语】
原来完全无法扩增的目的片段得到了扩增。
克隆化后,可确认序列相符。
实验例3:BMP-2基因的扩增(含GC-rich区域) |
【基因名】Mouse BMP-2
【样品】Mouse genome BAC clone DNA 0.1μg
【目的片段长】约2kb(包含GC-rich区域)
【引物】20mer、1μM(final)
【循环】
KOD FX:
(98℃,10sec-68℃,2min)×35cycles
A公司Long PCR酶:
(94℃,1min-60℃,30sec-72℃,2min)×35cycles
【数据提供】
鸟取大学医学部生命科学科分子生物学
安永 茉由 老师、佐藤 建三 老师
【来自老师的评语】
同样的实验以前失败过好多次,用KOD FX一次性就顺利地取得了成功。
同时需要说明的是,用A公司酶扩增得到的约2kb的条带,经测序,是别的基因。
实验例4: c-mos基因的扩增(为突变导入而进行的PCR) |
【基因名】原癌基因(proto oncogene)c-mos
【样品】Plasmid DNA 5ng
【目的片段长】约4.5kb
【引物】32mer、0.2μM (final)
【循环】
KOD FX:
95℃,3min- (95℃,30sec-55℃,1min-72℃,4min)×20cycles- 72℃,7min
A公司高保真性酶:推荐条件
【数据提供】
东京工业大学研究生院生命理工学研究科 生命信息专业
立花 和则 老师