【样品】
米曲菌 菌体（悬浊液）

【前处理】
悬浊（使用菌体）
＜用移液器取适量霉菌、在TE Buffer中悬浊＞

【目的片段】
Aspergillus oryzae amy gene for alpha-amylase　2.1 kb

【引物】
F： CCATGCTTGGAGGATAGCAA (Tm 58.7)
R： CACTGTCCAATGCCAGATTG (Tm 57.8 )

【反应液组成】
PCR grade water                                     7
2×PCR buffer for KOD FX        　         25 (μl)
2 mM dNTPs                                           10
10 pmol/μl Primer F                                1
10 pmol/μl Primer R                               1
KOD FX (1.0 U/μl）                                 1    
霉菌悬浊液　　　　　　            　　    5
 Total                                                         50 

【PCR 循环】

94℃ 5 min
↓
(98℃ 10 sec, 55℃ 30 sec, 68℃ 2 min) 35 cycles
↓
4℃∞

※A公司高效率PCR酶使用其推荐条件。

【结果】
无需特别的前处理，即可得到良好的扩增。直接用霉菌的菌落也可进行扩增，但如果带入过量的菌落，则可能会影响到实验的可重复性。取适量霉菌，放到50 μl的TE Buffer中悬浊，取该悬浊液5 μl添加到KOD FX的PCR反应液(总反应体系50 μl)中，可到重复性良好的扩增。