KOD FX实验例41:使用高成功率PCR酶KOD FX
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实验例25： |
【样品】
烟草叶（2mm小块）
【基因名・目的片段大小】
rbcL, rbcmtT 1.3~4.6 kb
【引物】
1.3 kb rbcL
Forward primer: 5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’
Reverse primer: 5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’
2.2 kb rbcmtT
Forward primer: 5’-TCCCCTTTGCTGACCTGGTAAGATTC-3’
Reverse primer: 5’-GATAAAAGCCACCTCTCAAGCCCAAG-3’
4.6 kb rbcmtT
Forward primer: 5’-CGGTAAAGCCAGGAATTGTACCAGAAGG-3’
Reverse primer: 5’-GGAAGATAATGGTGGCCTCAATCAAAGG-3’
【反应液组成】
DW
11 (μl)
2×PCR buffer for KOD FX
25
2mM dNTPs
10
10pmol / μl Primer F
1.5
10pmol / μl Primer R
1.5
KOD FX (1.0U /μl)
1
Total
50 (μl)
【PCR循环条件】
94℃, 2 min
↓
(98℃ 10sec, 68℃ 1min./kb) × 35 cycles
【评语】
直接以烟草叶为样品，可对4.6 kb的片段进行扩增。用本方法可简便地对植物进行基因分型。
