用途
RT-PCR
说明
使用高效率逆转录酶ReverTra Ace® 及高效率PCR酶KOD Dash®的高效率RT-PCR试剂盒。对这两个酶的最适反应条件进行了优化，可在同一管中进行逆转录反应和PCR反应，可省略将逆转录反应产物分管加样的操作。
ReverTra Ace®是高温反应性能和反应效率都提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-)，与原来的RTase相比，可合成更长的cDNA(已确认可合成最长至14kb的cDNA)。另外，PCR反应时用KOD Dash®进行的，可高效且迅速的进行RT-PCR。
特征
●高灵敏度
与原来的RT-PCR试剂盒相比，扩增效率有所提高，即使少量的模板也能高效率扩增。另外，由于可将RT反应液全部用于PCR反应，所以即使表达量少也可以高效率地检测到。
●简便
逆转录反应与PCR两步反应可在同一样品管中进行，操作简便。
●快速分析
KOD Dash在PCR时的延伸时间可以设定为1kb/30sec.，所以能够缩短RT-PCR的时间。
实验例
RT-PCR效率的探讨
以HeLa Total RNA为模板，以β-actin(838bp)为目的片段进行RT-PCR，改变模板量，比较了本公司原来的产品与其他公司的RT-PCR试剂盒。
将使用MagExtracterTM -RNA-抽提的HeLa Total RNA 100pg〜1.0μg分别加入Oligo(dT)引物中，42℃、20min.进行逆转录反应后，99℃加热5min.进行灭活反应。将RT反应液全部20μl加入到100μl反应体系中进行PCR。
可以确认：ReverTra Dash®与本公司原来的产品及其他公司的RT-PCR试剂盒相比，即使少量的模板RNA也可以进行RT-PCR。
参考文献
1) S. Natsuka et al., J. Biochem.(Tokyo), 130: 731-735(2001)
- 产品内容
KOD Dash(2.5U/μl) 100μl
ReverTra Ace® 100μl
5×RT Buffer[TRT-1B] 400μl
10×PCR Buffer*[LDP-1B] 1ml
Random Primer [FSK-301] 100μl
Oligo(dT)20 Primer [FSK-201] 100μl
10mM dNTPs[NTP-301] 200μl
RNase Inhibitor 100μl
RNase Free H2O 1.2ml
G3PDH Control Primer Set** 50μl each(10pmol/μl each)
Positive Control Human G3PDH RNA 50μl
*10×PCR Buffer与KOD Dash使用的Buffer组分相同。
**可适用于人、小鼠、大鼠及猪。G3PDH的假基因比较多，用于样品时，推荐用DNaseⅠ对样品进行处理。
相关产品
(另外销售的包装)
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace用 Buffer (5× RT Buffer) | TRT-1B | 1ml×1支 | RMB 50 | -20℃ | - |
| KOD Dash用Buffer | LDP-1B | 1ml×1支 | RMB 50 | -20℃ | - |
| dNTPs Mixture(10mM) | NTP-301 | 各2umoles/0.2ml × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
| oligo(dT)20 | FSK-201 | 1nmole × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
| Random Primer(9mer) | FSK-301 | 2.5nmoles × 1支 | RMB 200 | -20℃ | - |
●KOD系列用高效率TA克隆试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| TArget Clone™ | TAK-101 | 10次份 × 1支 | RMB 300 | -20℃ |
|
●高效率cDNA合成试剂盒
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace -α- | FSK-101 | 100次份 × 1 | RMB 1,950 | -20℃ |
|
●高效率逆转录酶
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| ReverTra Ace | TRT-101 | 10000U × 1支 | RMB 800 | -20℃ | - |
●高保真性PCR酶
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| KOD Dash | LDP-101 | 250U × 1支 | RMB 350 | -20℃ |
|
●RNase Inhibitor
| 品名 | Code No. | 包装 | 价格 | 保存温度 | 说明书下载 |
|---|---|---|---|---|---|
| RNase Inhibitor Recombinant type | SIN-201 | 2500U × 1支 | RMB 300 | -20℃ | - |
